[发明专利]银杏叶片完整叶绿体的提取方法

摘要

本发明为一种高得率的富含次生代谢物质的药用木本植物银杏完整叶绿体提取技术，属于生物化学领域。本发明方法是采用特定生育期的银杏叶片，先制得叶绿体粗颗粒，再通过对Percoll梯度离心，用特定的离心力，获得叶绿体。本发明可以有效的增加叶绿体提取的纯度和完整度。采用本方法获得的银杏叶绿体完整率达80%以上，且提取的叶绿体当中没有其他杂质。该叶绿体颗粒适用于进行细胞生物学、生物化学和分子生物学等方面的基础研究。

主权项

一种银杏叶片完整叶绿体提取方法，其特征在于，包括以下步骤：  1）选用发育成熟的银杏叶片作为提取材料；  2）Percoll梯度液的制备：将Percoll和2×叶绿体悬浮液按等体积混合均匀，并用垂直转子经38000g，4℃离心45min制造其梯度，放于4℃备用；所说的叶绿体悬浮液的组成为：20mM Tricine‑KOH,0.3M山梨醇,5mM MgCl2.6H2O, 2.5mM EDTA‑Na2;3）将叶片剪碎，在叶绿体粗提液中匀浆，匀浆后过滤；4）滤液经2070g，4℃离心2min，沉淀即叶绿体粗颗粒；5）将叶绿体粗颗粒悬浮于叶绿体悬浮液中，并缓慢的加入步骤2）的Percoll梯度上，用水平转子经13300g，4℃离心10min，离心后离心管下部有墨绿色沉淀；6）取出离心管中墨绿色沉淀用叶绿体悬浮液通过离心的方式对其进行漂洗，2070g，4℃离心2min，重复3‑4次，所得沉淀即为完整叶绿体；以上步骤2)‑6)的操作均需在0‑4℃进行。