[发明专利]一种单座苣苔的组织培养繁殖方法

摘要

本发明公开了一种单座苣苔的组织培养繁殖方法。它利用植物细胞的全能性和植物组织培养技术，将单座苣苔的叶片作为外植体，经消毒后，在合适的培养基和培养条件下培养，使其能够脱分化并分化形成不定芽，再经继代增殖、生根培养获得试管苗，试管苗经移栽壮苗炼苗后获得栽培苗。本发明从外植体的诱导到获得栽培苗只需要140天就可以获得栽培苗，大大加快单座苣苔的繁殖速度，通过继代增殖，每个月可以增殖4.6倍左右，因此可以在短时期内获得大量的试管苗，试管苗经移栽后，其成活率高达90％以上，从而能够使单座苣苔这一国家一级濒危植物得以保存和发展，为今后更进一步利用该物种奠定良好的基础。

主权项

一种单座苣苔(Metabriggsia ovalifolia W.T.Wang)的组织培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)不定芽的诱导：选择单座苣苔的叶片作为外植体，将叶片灭菌消毒后切块，接种于诱导培养基上培养，培养条件为22～28℃，黑暗培养或光强为20μmol m‑2 s‑1以下、光照14小时/天的条件下培养，直至诱导出不定芽，然后转到光强为50～80μmol m‑2s‑1、光照14小时/天的条件下继续培养10～20天；(2)继代增殖：将上一步骤获得的不定芽转入繁殖培养基中进行不定芽的增殖，培养条件为22～28℃，光强为50‑80μmol m‑2 s‑1，光照14小时/天；(3)生根培养：将增殖的不定芽转入生根培养基中培养，培养条件为22～28℃，光强为50‑80μmol m‑2 s‑1，光照14小时/天，使其生根，长成试管苗；(4)试管苗的移栽：将试管苗移植到蛭石和沙石按体积比为1∶1或火灰和细沙按体积比为1∶1的基质中，置于湿润、遮荫的环境下培养，浇水，施肥以满足试管苗生长所需的水分和营养需要，经常规培养后获得栽培苗；所述的诱导培养基为每升培养基中含有N‑苯基‑N′‑1，2，3‑噻二唑‑5‑脲0.2～2.0mg或6‑苄氨基嘌呤0.2～2.0mg，其余成份为MS；所述的繁殖培养基为每升培养基中含有6‑苄氨基嘌呤0.2～2.0mg、α‑萘乙酸0.1～0.5mg，其余成份为MS；所述的生根培养基为每升培养基中含有活性炭1g和吲哚‑3‑丁酸0.05～0.2mg或α‑萘乙酸0.05～0.2mg，其余成份为1/2MS。