[发明专利]吴屯杨叶片组织培养获得再生植株的方法

摘要

吴屯杨叶片组织培养获得再生植株的方法。选用未木质化的健康嫩叶经洗涤、消毒后主脉切2-4个切口，放入分化培养基中，先暗培42-54h，然后放在培养架上光照培养，待培养30天左右后，将长出的不定芽接入到抽茎培养基中，以促进茎的伸长生长。待不定芽长到2cm左右，将其移入到壮苗培养基中，使其生长为茎干粗壮的无根苗。待苗长到3cm左右时接入到生根培养基中，培养三周即可获得主根粗壮，侧根丰富的幼苗。本发明突出优点是：操作简单，取材方便且材料丰富，可有效提高吴屯杨组织培养获得再生植株的效率，对其以后遗传改良和遗传转化具有重要意义。

主权项

吴屯杨叶片组织培养获得再生植株的方法，其特征在于通过如下步骤实现的：(1)外植体消毒：选用未木质化的健康嫩叶为外植体，用70％的酒精消毒30s后，再用0.1％的升汞浸泡6‑8min，然后在无菌条件下用无菌水清洗5次，用无菌滤纸吸干；(2)分化培养：将叶片延垂直主脉切2‑4个切口，切口深达主脉，正面向上，放入分化培养基中，先暗培42‑54h，然后放在培养架上光照培养，培养30天即可长出大量不定芽；所述分化培养基为：MS+6BA0.8‑1.2mg/L+NAA0.1‑0.2mg/L；(3)抽茎及壮苗培养：接入抽茎培养基中，以促进茎的伸长生长，待不定芽长到2cm后，将其移入到壮苗培养基中，使其生长为茎干粗壮的无根苗；所述抽茎培养基为：MS+6BA1.0mg/L+NAA0.15mg/L+GA3 0.8‑1.5mg/L，壮苗培养基为：MS+蔗糖15‑25g/L+琼脂6.5g/L；(4)生根培养：待苗长到3cm时接入到生根培养基中，培养三周即可获得主根粗壮，侧根丰富的幼苗；所述生根培养基为：1/2MS+IBA0.15‑0.25mg/L+NAA 0.02‑0.04mg/L；以上培养步骤中：分化、抽茎培养基中加入30g/L的蔗糖，壮苗培养基中加入15‑25g/L的蔗糖，生根培养基中加入15g/L的蔗糖；以上所有培养基中均加入6.5g/L的琼脂，其pH为5.8，培养室温度25±2℃，除步骤2中暗培步骤外，其它培养的光照强度1500‑2000Lx，光照时间13‑15h/d；以上培养基中：MS为基本培养基的一种，是Murashige and Skoog Stock的简称；6‑BA为6‑苄氨基嘌呤的简称；NAA为α‑萘乙酸的简称；GA3为赤霉素的简称；IBA为吲哚丁酸的简称。