[发明专利]耐药绿脓杆菌宽噬噬菌体的制备方法

摘要

耐药绿脓杆菌宽噬噬菌体的制备方法，它涉及噬菌体的制备方法。它解决了现有解决现有绿脓杆菌噬菌体的分离方法存在分离纯化效果差的问题。方法：一、取污水样品；二、制备裂解液；三、裂解液与绿脓杆菌宿主菌悬液混合1培养，得混合液；四、制备单个噬菌斑；五、取噬菌体接入含有绿脓杆菌的培养基内培养至绿脓杆菌完全溶解，过滤后即完成。本发明中绿脓杆菌噬菌体的制备方法简单，且分离纯化效果好，无噬菌体断裂的现象。本发明制备所得耐药绿脓杆菌宽噬噬菌体，用于制作自身(疫苗)生物制剂，治疗耐药绿脓杆菌感染引起的疾病，尤其是表皮感染性疾患，作为外用喷剂使用，可避免由于使用抗生素而产生的耐药性绿脓杆菌。

主权项

耐药绿脓杆菌宽噬噬菌体的制备方法，其特征在于耐药绿脓杆菌宽噬噬菌体的制备方法按以下步骤进行：一、取1L医院污水，纱布过滤后加入CaCl2至浓度为1mmol/L，搅拌后离心并取上清液，得污水样品；二、向500ml三角瓶中加100ml三倍浓缩的牛肉膏蛋白胨液体培养基、200ml污水样品和2ml绿脓杆菌菌悬液，然后在37℃摇床160r/min震荡增殖培养12～24h，离心后取上清液并过滤，再在37℃下培养过夜，经无菌检查合格，得裂解液；三、取一环裂解液接种于LB液体培养基内，然后加入0.1ml浓度为107～108pfu/ml的绿脓杆菌宿主菌悬液，室温下混合15min，得混合液；四、取LB培养基溶化并冷却至48℃，然后加入0.2ml混合液并混匀，再倒入LB固体培养基上并于37℃下培养24h，得单个噬菌斑；五、用接种针在单个噬菌斑中刺一下，取噬菌体，然后接入含有绿脓杆菌的LB液体培养基内，于37℃下培养至绿脓杆菌完全溶解，过滤后，即完成耐药绿脓杆菌宽噬噬菌体的制备。