[发明专利]双关键酶基因转化提高丹参毛状根丹参酮含量的方法有效
| 申请号： | 201010264203.3 | 申请日： | 2010-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN101942467A | 公开（公告）日： | 2011-01-12 |
| 发明（设计）人： | 开国银;许辉;廖攀;周伟;张林 | 申请（专利权）人： | 上海师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N15/54;C12N15/82;A01H5/06;C12Q1/68;G01N30/89;G01N21/31 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 杨杰民 |
| 地址： | 200234 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于提高中药材丹参中丹参酮含量的方法，双基因转化提高丹参毛状根丹参酮含量的方法。丹参酮类物质具有抗肿瘤，抗菌消炎，抗氧化，抗动脉粥样硬化等多种药理活性，但是丹参中丹参酮含量低，无法满足医疗需要。本发明从丹参中克隆SmHMGR和SmGGPPS基因，构建含SmHMGR和SmGGPPS基因的表达载体，遗传转化丹参叶片获得转SmHMGR和SmGGPPS基因的丹参毛状根，半定量RT-PCR分析、高效液相色谱法测定丹参酮含量，DPPH清除自由基法测定转基因毛状根中丹参酮的抗氧化活性。本发明优点是：转基因丹参毛状根中丹参酮含量显著提高；丹参酮成本低。生产过程无环境污染。 | ||
| 搜索关键词： | 双关 基因 转化 提高 丹参 毛状根 含量 方法 | ||
【主权项】：
一种双关键酶基因转化提高丹参毛状根丹参酮含量的方法，步骤如下：(1)采用基因克隆方法从丹参中克隆丹参酮生物合成酶基因SmHMGR和SmGGPPS基因；(2)将SmHMGR和SmGGPPS基因连于表达调控序列，形成含SmHMGR和SmGGPPS基因的植物表达载体；(3)将步骤（2）获得含SmHMGR和SmGGPPS基因的植物表达载体转化发根农杆菌；获得含SmHMGR和SmGGPPS基因植物表达载体的发根农杆菌菌株；(4)将步骤（3）获得的发根农杆菌菌株遗传转化丹参叶片，获得PCR检测为阳性的转基因毛状根克隆；(5)半定量RT‑PCR测定丹参转基因毛状根中SmHMGR和SmGGPPS基因的相对表达量；(6)高效液相色谱法测定丹参转基因毛状根中丹参酮含量，筛选丹参酮含量高的丹参转基因毛状根株系；(7)DPPH清除自由基法测定丹参转基因毛状根中丹参酮的抗氧化活性。
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