[发明专利]一种检测液泡膜质子流的方法

摘要

本发明涉及一种检测液泡膜质子流的技术。该方法包括如下步骤：用扫描离子选择电极技术检测植物液泡的液泡膜离子流，得到所述植物液泡的液泡膜离子流值。实验证明，通过M3分离的液泡，不仅与M2有相同的分离效果(干净的观测背景和较高的液泡分离效率)，更重要的是在SIET的测定中M3和M2分离的液泡都表现出相似的H+流测定数值和测定稳定性(图.2)。同时，作为从M2简化的M3方法，比传统的超速离心法M2，操作更简单而且费用更低廉。所以，简化的液泡提取方法作为一种替代传统超速离心液泡提取方法，适合于SIET H+流测定。同时本发明方法对液泡具有非损伤性和稳定性。另外，用本发明方法检测到盐胁迫下转SeNHX1基因烟草液泡H+外流增强，验证了SeNHX1基因的功能。综上所述，本发明建立了适合于SIET的简化液泡提取方法和液泡H+流检测系统。

主权项

一种提取植物液泡的方法，包括如下步骤：提取并裂解植物叶片的原生质体，得到所述植物叶片的原生质体裂解溶液，分离纯化所述植物叶片的原生质体裂解溶液，得到所述植物的液泡提取液；所述分离纯化所述植物叶片的原生质体裂解溶液的方法包括如下密度梯度离心步骤：将所述植物叶片的原生质体裂解溶液加入到8％Ficoll-400溶液的上层，所述8％Ficoll-400溶液在下层，所述植物叶片的原生质体裂解溶液在上层，以500g-50000g的离心力离心10min-50min，收集上数第一层溶液，即为所述植物的液泡提取液；每1升所述8％Ficoll-400溶液是按照如下方法配制的：将25mmol Tris、(0.4-1)mol甘露醇和80g相对分子重量为400000的聚蔗糖混合，用水定容至1升，再用HCl调节pH至7.0-7.5，得到1升所述8％Ficoll-400溶液。