[发明专利]一种优化的蒙药阿给ISSR分子标记方法

摘要

本发明涉及分子生物学领域，具体地，涉及一种优化的蒙药阿给ISSR分子标记方法。根据本发明的优化的蒙药阿给ISSR分子标记方法包括以下步骤：1)提取阿给的基因组DNA；2)进行ISSR扩增，其中，所述ISSR扩增的反应体系为：20μL反应体系中含有10×PCR缓冲液2μL，模板DNA50ng，此外，Mg2+为1.5mmol·L-1，dNTP为0.25mmol·L-1，Taq酶为1.5U，引物为0.75μmol·L-1。所述ISSR扩增的条件为：94℃退火5min，然后94℃1min、56℃40s、72℃1min30s 40个循环，最后72℃延伸5min。本发明所建立的蒙药阿给ISSR反应体系扩增出的条带具有多态性高、特异性强、背景清楚及稳定性强的优点。

主权项

一种优化的蒙药阿给ISSR分子标记方法，所述方法包括以下步骤：1)提取阿给的基因组DNA；2)进行ISSR扩增。其中，所述ISSR扩增的反应体系为：20μL反应体系中含有10×PCR缓冲液2μL，其中Mg2+为1.5mmol·L-1，模板DNA50ng，dNTP为0.25mmol·L-1，Taq酶为1.5U，引物为0.75μmol·L-1。所述ISSR扩增的条件为：94℃退火5min，然后94℃1min、56℃40s、72℃1min30s 40个循环，最后72℃延伸5min。其中，所述引物序列如以下所示引物       序列5’-3’UBC 807    AGA GAG AGA GAG AGA GTUBC 810    GAG AGA GAG AGA GAG ATUBC 811    GAG AGA GAG AGA GAG ACUBC 823    TCT CTC TCT CTC TCT CCUBC 834    AGA GAG AGA GAG AGA GYTUBC 840    GAG AGA GAG AGA GAG AYTUBC 841    GAG AGA GAG AGA GAG AYCUBC 845    CTC TCT CTC TCT CTC TRGUBC 857    ACA CAC ACA CAC ACA CYGUBC 864    ATG ATG ATG ATG ATG ATGUBC 873    GAC AGA CAG ACA GAC AUBC 887    DVD TCT CTC TCT CTC TC。