[发明专利]四配位体金属螯合层析填料乙二胺二乙酸琼脂糖凝胶制备方法

摘要

本发明提供了一种金属螯合层析填料制备方法，是通过4％-6％琼脂糖凝胶和乙二胺二乙酸结合而成乙二胺二乙酸琼脂糖凝胶(Ethylenediamine diacetic acid，EDDA琼脂糖凝胶)。本发明首先提供了快速简单制备乙二胺二乙酸方法，进一步提供了乙二胺二乙酸与琼脂糖凝胶结合的方法。乙二胺二乙酸琼脂糖凝胶作为金属螯合层析填料对过渡金属有特强的金属螯合性，能够与过渡金属离子强烈结合，特别适用于以过渡金属为螯合物的蛋白质提纯。目前次甲基三乙酸琼脂糖凝胶(NTA琼脂糖凝胶)被广泛用于蛋白质提纯，本发明乙二胺二乙酸琼脂糖凝胶与次甲基三乙酸琼脂糖凝胶(NTA琼脂糖凝胶)一样是四配体金属螯材料，但是本发明的配位体的原子与NTA琼脂糖凝胶不同，本发明比NTA琼脂糖凝胶多出一个氮原子而少一个乙酸根参加金属鳌合，故在蛋白质提纯过程中可以展现出新的特异性，从而给蛋白质纯化提供了新的金属螯合层析填料选择。

主权项

乙二胺二乙酸快速制备方法，包括以下步骤：1)在控制温度下，往乙二胺10‑80％水溶液中定量慢慢加入溴乙酸(BrCH2COOH)，乙二胺与溴乙酸摩尔浓度准确控制在1∶2，溴乙酸摩尔浓度准确控制非常重要，应当准确的控制在1摩尔乙二胺与2摩尔溴乙酸的比例。2)慢慢加入30％碳酸钠或其他碱溶液调节pH值至大约9以上，搅拌，控温，使乙二胺与入溴乙酸反应完全生成乙二胺二乙酸，乙二胺与溴乙酸化学反应式为：NH2‑CH2‑CH2‑NH2+2BrCH2COOH→NH(CH2COOH)‑CH2‑CH2‑N(CH2COOH)+2Br3)副产物溴可以用物理或化学方法除去。例如，加硝酸银沉淀，过滤。