[发明专利]一种制备尿激酶的方法

摘要

一种制备尿激酶的方法，其特征在于采用了D160阳离子树脂交换法、亲和膜色谱法及亲和层析法相结合，以尿激酶粗品为原料制备尿激酶。所得到的尿激酶质量优于现有国内水平，尿激酶比活可达到150,000IU/mg.pr以上，高分子尿激酶相对含量可达到96％以上，尿激酶生物活性回收率可达到65％。本方法解决了现有尿激酶制备方法普遍存在的操作繁琐、产品质量差，收率低和生产成本高等问题。

主权项

一种制备尿激酶的方法，其特征在于该方法依次包括如下步骤：(1)取一定量的尿激酶粗品，用8～10倍尿激酶粗品量的pH6.0，0.1mol/L磷酸缓冲液分2～3次加入溶解，每次搅拌溶解0.5～1.0小时，然后离心或过滤，合并上清或滤液，体积较大时进行超滤浓缩，得到的澄清溶液备用；(2)将步骤(1)得到的澄清溶液调电导率，使其与D160阳离子树脂层析柱使用的平衡液电导率一致，再上用含0.15～0.30mol/L氯化钠的pH6.0，0.1mol/L磷酸缓冲液平衡的D160阳离子树脂层析柱，然后用含0.15～0.30mol/L氯化钠的pH6.0，0.1mol/L磷酸缓冲液洗涤；最后用pH10，1～3％氨水进行洗脱，收集洗脱活性峰；(3)将步骤(2)收集得到的洗脱活性峰用醋酸调pH7.2，然后上亲和膜纯化柱，用含0.45～0.60mol/L氯化钠的pH7.2，0.1mol/L磷酸缓冲液洗涤，再用含0.25～0.35mol/L氯化钠的pH3.5～4.5，0.1mol/L醋酸缓冲液洗脱，收集洗脱活性峰；(4)将步骤(3)收集得到的洗脱活性峰用醋酸调pH7.2，然后上亲和层析柱，用含1.0～2.0mol/L氯化钠的pH7.2，0.1mol/L磷酸缓冲液洗涤，再用含0.35～0.45mol/L氯化钠的pH3.5～4.5，0.1mol/L醋酸缓冲液洗脱，收集洗脱活性峰，过滤，最后进行冷冻干燥，得到尿激酶。