[发明专利]自体组织成纤维细胞培养植方法

摘要

本发明涉及一种自体组织成纤维细胞培养植方法，其特征在于依次进行皮肤标本处理步骤和成纤维细胞培养步骤，所述成纤维细胞培养步骤包括原代成纤维细胞培养步骤，还可根据实际需要设置成纤维细胞传代步骤、成纤维细胞冻存步骤和成纤维细胞解冻复苏步骤。本发明通过自体的成纤维细胞的体外培养、扩增方法大量培养自体组织成纤维细胞，用于回输治疗皮肤胶原缺损性疾病或变性疾病，简单方便、安全性好，使用时不会出现排异反应，效果显著。

主权项

1、一种自体组织成纤维细胞培养植方法，其特征在于依次进行皮肤标本处理步骤和成纤维细胞培养步骤，所述皮肤标本处理步骤包括：无菌条件下切取的皮肤标本，立即放入装有基础培养液的离心管中封存并运输至实验室，置于4℃冰箱中，24小时内处理皮肤标本，所述基础培养液采用DMEM低糖培养液，含重量百分比为20％的胎牛血清，100单位/毫升青霉素和100单位/毫升链霉素；所述成纤维细胞培养步骤包括原代成纤维细胞培养步骤，所述原代成纤维细胞培养步骤包括：在超净工作台无菌条件下将皮肤标本移入3.5cm培养皿中，用基础培养液冲洗，修剪皮肤标本并去除皮下组织、脂肪，剪切皮肤标本成1mm3小块，置小块皮肤标本于50ml培养瓶并使真皮层紧贴培养瓶底部并均匀分布，翻转培养瓶使得瓶底朝上，加入基础培养液2ml并保持基础培养液与小块皮肤标本不接触，拧紧瓶塞，将培养瓶倒置于37℃，5％CO2培养箱中，1小时后缓慢将培养瓶翻转让基础培养液慢慢覆盖附于瓶底上的小块皮肤标本，再倒置培养，2小时后正放培养瓶，使基础培养液与小块皮肤标本接触，每3～5天更换基础培养液一次，每次2ml，使得成纤维细胞大量繁殖。