[发明专利]壳聚糖固定化乙酰胆碱酯酶电化学生物传感器及应用

摘要

本发明涉及一种电化学生物传感器及其应用，特别涉及一种壳聚糖固定化乙酰胆碱酯酶电化学生物传感器及其应用。即采用壳聚糖，采用层层自组装方法固定乙酰胆碱酯酶，而不是简单的交联法。这种生物传感器检测有机磷和氨基甲酸酯类农药不仅具有较高的灵敏度，而且制备的酶电极不易脱落，具有较好的重复性和稳定性，寿命比较长。

主权项

1、一种壳聚糖固定化乙酰胆碱酯酶电化学生物传感器，其特征在于通过下列步骤制备：(1)、玻碳电极经过抛光、在pH值为7.40的磷酸盐缓冲液中循环伏安扫描10圈电化学活化进行预处理；(2)、将步骤(1)经预处理过的玻碳电极与铂电极组成两电极系统进行电沉积2小时，形成亮蓝色的带有大量负电荷的碳纳米管的电沉积层；(3)、将步骤(2)中经过电沉积后的玻碳电极浸入到用2mol/L的醋酸溶液分散，并且用氢氧化钠调节pH值为5.0的0.5％的壳聚糖溶液中，进行壳聚糖的静电自组装，15min后取出用去离子水仔细冲洗2min，再浸入到pH9.18的四硼酸钠溶液作为分散剂的碳纳米管的分散液中，进行碳纳米管的静电自组装，其中碳纳米管的浓度为1mg·mL-1，15min后取出，用去离子水小心冲洗2min，至此，碳纳米管修饰层为1层，反复操作，直到碳纳米管的修饰层层数为5，最后，将得到的最外层为多壁碳纳米管的电极在红外灯下烘干；(4)、继续将步骤(3)中所得的电极浸入到用2mol/L的醋酸溶液分散，并且用氢氧化钠调节pH值为5.0的0.5％的壳聚糖溶液中，进行壳聚糖的静电自组装，15min后取出用去离子水仔细冲洗2min，除去多余的壳聚糖，再浸入用pH为7.4的PBS配制的100U乙酰胆碱酯酶溶液中15min后取出，用去离子水仔细冲洗电极表面2min，至此完成一层的乙酰胆碱酯酶的组装，如此交替浸泡冲洗，直到乙酰胆碱酯酶的修饰层数为4，便得到壳聚糖固定化乙酰胆碱酯酶电化学生物传感器。