[发明专利]一种开放式蛋白差异显示方法

摘要

本发明涉及一种直接在蛋白质水平上分析蛋白表达差异的方法。本发明技术方案是构建适体DNA或RNA随机序列库，抽提适体DNA或RNA随机序列库中细胞的蛋白质，得到可反应蛋白水平变化的DNA或RNA随机序列库，对可反应蛋白水平变化的DNA或RNA随机序列库中的靶细胞和对照细胞的进行消减杂交后，PCR克隆消减序列以得到差异显示文库并测序，用标记引物扩增制备相应类型的DNA或RNA aptamer，DNA或RNA aptamer筛选确定具有表达差异和功能差异的特异性蛋白。本发明解决了现有技术DD-PCR方法、差异分析法、酶降解消减方法等存在的各自缺陷。本发明具有将蛋白水平上的表达差异通过aptamer转移至DNA或RNA水平上的差异显示，从而达到了简捷快速地高通量筛选表达差异蛋白的目的。

主权项

1.一种开放式蛋白差异显示方法，包括如下步骤：(1)通过DNA合成或RNA合成的方法构建适体DNA或RNA随机序列库，将经过处理固定了的对照细胞和病理细胞在一致条件下孵化，然后洗去未结合或非特异结合细胞蛋白的DNA或RNA随机序列库；(2)抽提上述适体DNA或RNA随机序列库中细胞的蛋白质，用苯酚氯仿分离沉淀蛋白质，取含有DNA或RNA的上清液，用真空干燥机浓缩DNA或RNA或酒精沉淀DNA或RNA从而得到可反应蛋白水平变化的DNA或RNA随机序列库；(3)对上步中得到的可反应蛋白水平变化的DNA或RNA随机序列库中的靶细胞和对照细胞进行消减杂交后；PCR克隆消减序列以得到差异显示文库并测序，选取几个到几十个克隆，用标记引物扩增制备相应类型的DNA或RNA aptamer；(4)利用上步的DNA或RNA aptamer筛选确定具有表达差异和功能差异的特异性蛋白。