[发明专利]一种循环超滤-盐析结晶分离精制卵清溶菌酶的方法

摘要

本发明提供一种应用循环超滤—盐析结晶分离精制卵清溶菌酶的方法。首先对卵清进行稀释、微滤和超滤等预处理，获得卵清溶菌酶原料液；原料液循环流经切向流超滤器中的膜组件，卵清溶菌酶溶液得到不断分离和浓缩；再利用超滤和盐析结晶集成进一步浓缩卵清溶菌酶溶液；卵清溶菌酶溶液在结晶罐中盐析结晶。应用本发明方法，所获得的溶菌酶晶体粒径大于0.1mm，粒度均匀、形貌完整，具有典型的晶体X-射线衍射峰；比活力可达20,000U/mg以上，酶回收率可达70％以上，纯化因子达25.1。

主权项

1、一种循环超滤一盐析结晶分离精制卵清溶菌酶的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)卵清的预处理，获得卵清溶菌酶原料液用磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液将卵清稀释6-12倍，使用高压均质机在18-28MPa下均质后，使用0.22μm或0.45μm微滤膜过滤除去固体杂质，然后用截留分子量为20-40kD的超滤膜过滤，滤出液即为卵清溶菌酶原料液；(2)卵清溶菌酶原料液的分离和浓缩在20-50℃、操作压力为0.10-0.45MPa下在切向流超滤装置中不断循环超滤卵清溶菌酶原料液，至卵清溶菌酶原料液的溶菌酶含量为1-4％(w/v)；(3)超滤和盐析结晶集成进一步浓缩卵清溶菌酶原料液然后在卵清溶菌酶原料液中添加NaCl至NaCl浓度为1-4％(w/v)，在切向流超滤装置中，在20-50℃、操作压力0.10-0.45MPa下继续超滤浓缩至卵清溶菌酶原料液中溶菌酶含量为3-6％(w/v)；(4)卵清溶菌酶在结晶罐中盐析结晶将切向流超滤装置的截留液排入结晶罐，添加NaCl至NaCl在卵清溶菌酶原料液中的浓度为3-6％(w/v)，结晶温度为25-35℃，搅拌，使溶菌酶在结晶罐中成核并养晶至晶体不再长大，离心分离晶浆中的晶体，真空干燥，即可得到本发明的溶菌酶晶体。