[发明专利]一种使用ACTB基因分析ARHGDIB基因表达量的RT-PCR技术

摘要

本发明涉及一种使用ACTB基因分析ARHGDIB基因表达量的RT-PCR技术。本发明分别根据人的ARHGDIB基因mRNA和ACTB基因mRNA设计并筛选到最佳PCR检测方案，能同时对标本中的两个基因的mRNA进行检测，根据两个基因的mRNA检测Ct值与正常对照两个基因的mRNA检测Ct值的ΔΔCt值，可分析ARHGDIB基因与看家基因-ACTB基因之间的相对表达量。同时本发明提供相应的一步RT-PCR检测试剂盒。本发明还提供人工合成的两种RNA，减少假阴性的发生率；本发明检测速度快，能排除基因组DNA的干扰，特异性强，且灵敏度高，可用于ARHGDIB基因表达方面的研究和临床。

主权项

一种使用ACTB基因分析ARHGDIB基因表达量的RT-PCR技术，其特征在于包含用于检测ARHGDIB基因mRNA的一对特异性引物和一条特异性探针以及用于检测ACTB基因mRNA的一对特异性引物和一条特异性探针，扩增目标片段长度分别为139bp和147bp，引物和探针序列分别为：检测ARHGDIB基因mRNA的引物和探针：引物1：5`-ACCACAGAAGTCCCTGAAAGAGCT-3`(Seq No.1)引物2：5`-GGTGAGCCGGGTGACAACGAC-3`(Seq No.2)探针1：5`-TCGGATCTGTCACCACAGGACCA-3`(Seq No.3)或探针2：5`-TGGTCCTGTGGTGACAGATCCGA-3`(Seq No.4)检测ACTB基因mRNA的引物和探针：引物3：5`-CAATGAGCTGCGTGTGGCAG-3`(Seq No.5)引物4：5`-AGCACAGCCTGGATAGCAAC-3`(Seq No.6)探针3：5`-CGAGAAGATGACCCAGATCATGTTTG-3`(Seq No.7)或者上述引物序列的互补序列，或者上述序列同源性大于75％的序列。