[发明专利]微孔板固定与纳米硫化铅标记电化学检测转基因大豆的方法无效
| 申请号： | 200810093987.0 | 申请日： | 2008-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN101260441A | 公开（公告）日： | 2008-09-10 |
| 发明（设计）人： | 孙伟;高宏伟;焦奎;钟江华;覃鹏 | 申请（专利权）人： | 青岛科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N27/26 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 | 代理人： | 张中南 |
| 地址： | 266042*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种微孔板固定与纳米硫化铅标记电化学检测转基因大豆的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：环介导等温扩增反应扩增品系为GTS 40－3－2的转基因大豆外源基因CP4 EPSPS得到扩增反应物－待测外源基因CP4 EPSPS的双链目标序列，将该双链目标序列在水浴中热解成单链目标序列后在微孔板上进行固定，然后将纳米硫化铅对来源于外源基因CP4 EPSPS的探针序列进行标记得到标记探针序列，将该标记探针序列与固定在微孔板上的目标序列进行分子杂交并进行同位镀汞阳极溶出伏安法的电化学测定，进而达到对检测转基因大豆外源基因(CP4 EPSPS)的电化学检测的目的。本发明优点是快速、特异性强、灵敏度高而且使用方便。 | ||
| 搜索关键词： | 微孔 固定 纳米 硫化铅 标记 电化学 检测 转基因 大豆 方法 | ||
【主权项】：
1.一种微孔板固定与纳米硫化铅标记电化学检测转基因大豆的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：环介导等温扩增反应扩增品系为GTS 40-3-2的转基因大豆外源基因CP4EPSPS，得到外源基因CP4EPSPS的双链目标序列扩增产物，将该双链目标序列在水浴中热解成单链目标序列后在微孔板上进行固定，然后将纳米硫化铅对来源于外源基因CP4EPSPS的探针序列进行标记得到标记探针序列，将该标记探针序列与固定在微孔板上的目标序列进行分子杂交并进行同位镀汞阳极溶出伏安法的电化学测定，且环介导等温扩增反应中的试剂包括：(1)环介导等温扩增反应液：包括10×Thermopol反应缓冲液、300-500μmol/L dNTP、2-4mmol/L硫酸镁、0.8-1.2μmol上游内引物、0.8-1.2μmol/L下游内引物、0.2-0.3μmol/L上游外引物、0.2-0.3μmol/L下游外引物和1-1.5mol/L甜菜碱；1U/μL UNG酶；其中10×Thermopol反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X-100；其中：上游内引物：5-AATCGAGCGGCGCCTCAGGCCGTAAGGAAGGCGAC ACC-3、下游内引物：5-AATGCCGCCACGGGCTCGTCGCCGATGAAGGTG-3、上游外引：5-CCATGGGCGCCAGGAT-3、下游外引物：5-ATCGGGCGCTTTGTGAG-3。(2)Bst DNA聚合酶：8U/μL。
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