[发明专利]异源表达和纯化人类葡萄糖转运蛋白家族成员GLUT1、GLUT2、GLUT3的方法

摘要

本发明公开了一种异源表达和纯化人细胞膜上葡萄糖转运蛋白家族成员GLUT1、GLUT2、GLUT3的方法，其步骤为：构建诱导型融合蛋白表达载体GST－GLUT1、GST－GLUT2、GST－GLUT3并转化裂殖酵母；鉴定裂殖酵母转化子；GST－GLUT1、GST－GLUT2、GST－GLUT3三种融合蛋白在裂殖酵母中的诱导表达；确认GLUT1、GLUT2、GLUT3基因在裂殖酵母中得到表达；分离和纯化上述三种融合蛋白；检测和鉴定分离纯化的上述三种融合蛋白；从上述三种融合蛋白中的分别分离和纯化人类GLUT1、GLUT2、GLUT3蛋白。本发明的方法可以应用于在裂殖酵母中表达高等动植物的膜蛋白，并且获得的蛋白质具有翻译后的修饰作用和生物活性。

主权项

1.一种异源表达和纯化人类葡萄糖转运蛋白家族成员GLUT1、GLUT2、GLUT3的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)构建诱导型融合蛋白表达载体GST-GLUT1、GST-GLUT2、GST-GLUT3；(2)所述GST-GLUT1、GST-GLUT2、GST-GLUT3融合蛋白表达载体转化裂殖酵母，得到裂殖酵母转化子；(3)筛选和鉴定裂殖酵母转化子；(4)GST-GLUT1、GST-GLUT2、GST-GLUT3融合蛋白在裂殖酵母中的诱导表达；(5)分离和纯化GST-GLUT1、GST-GLUT2、GST-GLUT3融合蛋白；(6)检测分离纯化的GST-GLUT1、GST-GLUT2、GST-GLUT3融合蛋白；(7)鉴定分离纯化的GST-GLUT1、GST-GLUT2、GST-GLUT3融合蛋白；(8)分别从GST-GLUT1、GST-GLUT2、GST-GLUT3融合蛋白中分离和纯化得到人类GLUT1、GLUT2、GLUT3蛋白。