[发明专利]获产莨菪碱和东莨菪碱木本曼陀罗毛状根再生植株的方法

摘要

本发明提供了一种利用组织培养技术诱导木本曼陀罗毛状根，获得高产莨菪碱和东莨菪碱的木本曼陀罗的再生植株的方法。涉及诱导木本曼陀罗毛状根再生植株的方法，获得可生产莨菪碱和东莨菪碱的木本曼陀罗完整植株，其过程是用合适的组织培养技术诱导木本曼陀罗毛状根，获得了木本曼陀罗再生植株，经分子检测确为遗传转化的毛状根再生植株，HPLC检测表明组织培养获得的木本曼陀罗毛状根再生植株能够生产莨菪碱和东莨菪碱，且其产量均显著高于野生植株。本方法可以为莨菪碱和东莨菪碱的生产提供一种新型可持续的新型药源。

主权项

1.一种获产莨菪碱和东莨菪碱木本曼陀罗毛状根再生植株的方法，特征在于采用组织培养技术，用木本曼陀罗毛状根外植体诱导获得生长正常的木本曼陀罗活体植株，其步骤如下：(1)木本曼陀罗毛状根愈伤组织的诱导和不定芽的分化，方法如下：A：将木本曼陀罗毛状根切成约2-3cm长的节段，转入愈伤组织诱导培养基上，置于25℃±1.0℃恒温培养，15h光照/天，15天后毛状根大部分愈伤化，随着培养时间延长，愈伤组织体积迅速增大；B：从诱导出的毛状根愈伤组织中选取生长良好、无褐化的部分毛状根转入不定芽诱导培养基，经过14天光照培养后，在愈伤组织上开始出现芽点，随着培养时间延长，芽点陆续分化出芽，芽不断伸长，并长出真叶；(2)木本曼陀罗不定芽的生根培养，切取从木本曼陀罗毛状根分化出的绿色不定芽，转入生根培养基中，置于25℃±1.0℃恒温培养，15h光照/天，6天后开始长出不定根，逐渐形成完整的再生植株；(3)木本曼陀罗毛状根的再生植株的分子检测，方法如下：A、提取木本曼陀罗毛状根再生植株DNA；B、获得含rolB和rolC引物的PCR反应体系；C、PCR反应扩增毛状根特有基因rolB和rolC；D、电泳检测目标条带；(4)木本曼陀罗毛状根再生植株中莨菪碱和东莨菪碱的含量检测；(5)木本曼陀罗毛状根再生植株的移栽，选取生长健壮的无菌植株，经过室温炼苗后移栽到花盆中，短期驯化后获得生长正常的木本曼陀罗植株。