[发明专利]一种获得产莨菪碱和东莨菪碱的木本曼陀罗毛状根的方法

摘要

本发明提供了一种利用基因工程技术遗传转化木本曼陀罗，获得生产莨菪碱和东莨菪碱的木本曼陀罗的毛状根的方法。涉及发根农杆菌遗传转化木本曼陀罗的方法，遗传转化获得可生产莨菪碱和东莨菪碱的木本曼陀罗毛状根，其过程是用发根农杆菌遗传转化木本曼陀罗，获得了木本曼陀罗毛状根，经分子检测确为遗传转化的毛状根，HPLC检测表明遗传转化获得的木本曼陀罗毛状根能够生产莨菪碱和东莨菪碱。本方法可以为莨菪碱和东莨菪碱的生产提供一种可持续的新型药源。

主权项

1.一种获得产莨菪碱和东莨菪碱的木本曼陀罗毛状根的方法，特征在于采用转基因技术，用发根农杆菌遗传转化木本曼陀罗的器官，其步骤如下：(1)木本曼陀罗无菌外植体的获得；(2)采用转基因方法转移发根农杆菌的Ri质粒的T-DNA到木本曼陀罗细胞、组织、器官、植株中；其中转基因方法选择发根农杆菌Ri质粒介导遗传转化、基因枪法介导的遗传转化、花粉管通道介导基因转化或生殖细胞浸泡法介导基因转化；包括以下步骤；A、活化发根农杆菌；B、发根农杆菌浸染木本曼陀罗外植体；C、发根农杆菌与木本曼陀罗外植体的共培养，步骤如下：I、将侵染后的木本曼陀罗外植体接种在MS+AS 100μmol·L-1固体培养基上；II、置于温度为25℃±1.0℃恒温暗培养48h；D、外植体的除菌培养；(3)木本曼陀罗毛状根的获得与继代培养；(4)木本曼陀罗毛状根的分子检测，方法如下：A、提取木本曼陀罗毛状根DNA；B、获得含rolB和rolC引物的PCR反应体系；C、PCR反应扩增毛状根特有基因rolB和rolC；D、电泳检测目标条带；(5)木本曼陀罗毛状根中莨菪碱和东莨菪碱的含量检测。