[发明专利]重组cecA－mil杂合基因抗菌肽

摘要

本发明重组cecA－mil杂合基因抗菌肽，用于生物技术制药工业中的基因工程生产疫苗药物的技术领域。根据天蚕素A和蜂毒素，以毕赤酵母偏爱的密码子设计合成引物，进行SOE法PCR出改造的cecA－mil杂合肽基因序列，同载体pPICZα－A连接后，构建重组酵母表达质粒。经Zeocin筛选、特异PCR鉴别和缺失酶切位点鉴定阳性的质粒命名为pPICZα－A－CM。将重组质粒转化到酵母菌X－33中，筛选目的基因高拷贝重组菌株，在醇氧化酶启动子调控下，1.8kD的重组蛋白获得表达，且具有较为明显的抑菌活性。以此来开发研究该重组抗菌肽的基因工程产品研究。

主权项

1、重组cecA-mil杂合基因抗菌肽，其特征在于：重组cecA-mil杂合抗菌肽的基因设计与合成。根据cecropinA和milittin的氨基酸序列，选用毕赤酵母偏好密码子，利用DNASTAR、primer premier软件设计了引物基因片断F1和F2、F3和F4，引物F1和F2经SOE-PCR扩增出改造的cecA-mil杂合肽基因序列(45个碱基)。设计的CecA-mil基因全长60bp，包括15个氨基酸的编码序列和终止密码子，基因N端、C端分别设有EcoRI、XbaI粘性末端，并在基因的N端引入毕赤酵母Kex2蛋白酶裂解位点。F3：5’-tactttcataattgcgactg-3’F4：5’-ccttcttgaacaacttcc-3’引物基F3和F4用于重组载体及重组酵母菌的鉴定，其中F3位于载体序列上，F4则位于插入外源基因(cecA-mil)区。