[发明专利]桦褐孔菌胞内外混合多糖及其制备方法和药物用途

摘要

本发明涉及一种桦褐孔菌胞内外混合多糖及其制备方法和药物用途，属于医药领域。无菌条件下取斜面菌种接入新鲜的综合固体培养基的平皿内，经过一级发酵、二级发酵，将二级发酵产物进行抽滤，得到桦褐孔菌的菌丝体和发酵液；经过浓缩、水提醇沉得桦褐孔菌胞内外混合多糖。本发明利用液体深层发酵所得的发酵产物中，同样含有药用活性成分，其生长周期短，可以成为获取活性成分的一种有效手段。本发明经过实验，从桦褐孔菌菌丝体及其发酵液中提取得到混合粗多糖，并对其抗肿瘤活性进行了研究，得出桦褐孔菌胞内外混合多糖具有高抑瘤活性和低毒性的特征。

主权项

1、一种桦褐孔菌胞内外混合多糖，其特征在于它是由下列方法得到的：一、无菌条件下取斜面菌种接入新鲜的综合固体培养基的平皿内，培养温度26-29℃，培养240-360小时；该综合固体培养基配方(g/100ml)：马铃薯16-26，葡萄糖1.2-3.2，琼脂1.5-2.5，MgSO40.12-0.2，KH2PO40.28-0.35，VB10.8-1.2mg加水定溶至所需体积，pH值自然；二、一级发酵：在无菌条件下，用6mm的打孔器菌落边缘处打孔，用接种铲取6-10块的菌饼接入含有100-150ml液体培养基的250ml摇瓶中，置于26-29℃，转速为120-185rpm/min的摇床中，恒温培养210-300小时后进行二级发酵培养；该液体培养基配方(g/100ml)：马铃薯16-26，葡萄糖1.2-3.2，MgSO40.12-0.2，KH2PO40.28-0.35，VB10.8-1.2mg加水定溶至所需体积，pH值自然；三、二级发酵：取一级发酵液接种于含有250-350ml该液体培养基的1000ml二级摇瓶中，接种量为10％-13％，置于26-29℃，转速为120-170rpm/min的摇床中，恒温培养160-240小时；四、将二级发酵产物进行抽滤，得到桦褐孔菌的菌丝体和发酵液；将菌丝体用蒸馏水冲洗三次，置55-60℃鼓风干燥箱中烘干，称重，60目粉碎，按蒸馏水与菌丝体粉末比45-50∶1置于超声仪内，48-52℃，65-75Hz超声提取40min，重复提取2-3次，合并提取液，45-55℃减压浓缩至原体积的1/5-1/10，得胞内多糖浓缩液；将发酵液45-55℃减压浓缩至原体积的1/5-1/10，并与胞内多糖浓缩液合并，加入95％乙醇，搅拌，使乙醇终浓度达到75％-80％，4℃沉淀8-12小时，收集沉淀，用无水乙醇洗涤3次，55-60℃恒温干燥，重复2～3次，得桦褐孔菌胞内外混合多糖。