[发明专利]一种枯草芽孢杆菌生产γ－谷氨酰转肽酶的方法

摘要

一种枯草芽孢杆菌生产γ－谷氨酰转肽酶的方法，属于食品生物技术领域。本发明对γ－谷氨酰转肽酶产生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SK11.004进行斜面、种子、发酵三级培养；从发酵液中分离纯化得到γ－谷氨酰转肽酶酶粉。本发明提供的利用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SK 11.004生产γ－谷氨酰转肽酶的方法，其育种工作量小，费用低，安全性能可靠，可以进行液体发酵生产，成本低，可用于大规模生产，本发明使用的枯草芽孢杆菌所产γ－谷氨酰转肽酶酶活可达4U/mL以上。其发酵产品无毒，可以直接用于生产许多有价值的γ－谷氨酰类化合物，如L－γ－谷氨酰－L－多巴、γ－谷氨酰牛磺酸、γ－谷氨酰色氨酸、谷胱甘肽、茶氨酸等。

主权项

1.一种枯草芽孢杆菌生产γ-谷氨酰转肽酶的方法，其特征在于：(1)对γ-谷氨酰转肽酶产生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SK11.004进行斜面、种子、发酵三级培养；斜面培养：培养基组分以g/L计：蛋白胨8～10，牛肉膏3～5，氯化钠3～5，琼脂20，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20min，培养条件为：培养温度35～40℃，培养时间8～16小时；种子培养：培养基组分以g/L计：葡萄糖15～20，酵母膏10～15，玉米浆8～12，MgSO4·7H2O 0.3～0.5，K2HPO4 0.5～2，含消泡剂聚氧乙烯氧丙烯甘三油0.5mL/L，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20min；培养条件为：250mL三角瓶装液30mL，摇瓶转速200rpm，培养温度37℃，培养时间8～12小时；一级种子培养基按体积百分2.5％接入装液量为18升液体种子培养基的30升二级种子罐中，培养条件为：搅拌速度200rpm，控制通风量：0～5小时为8～10L/min，5～12小时为12～15L/min；控制培养温度为35～40℃，培养时间8～12小时；发酵培养：培养基组分以g/L计：蔗糖15～35，胰蛋白胨5～8，玉米浆12～15，MgSO4·7H2O 0.3～0.5，K2HPO4 0.5～2，消泡剂聚氧乙烯氧丙烯甘三油2mL/L，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20min，调pH 7.0～7.2；种子培养基按体积百分2.5％接入装液量700升液体发酵培养基的1吨发酵罐中，培养条件为：搅拌速度200rpm，控制通风量：0～8小时为10～12L/min，8～16小时为14～16L/min；控制培养温度为35～40℃，培养时间14～16小时；(2)从发酵液中分离纯化得到γ-谷氨酰转肽酶酶粉；将制得的发酵液经离心或板框过滤去菌体，制得发酵液上清液，经超滤除去盐和杂蛋白，再经20％酒精沉淀，离心得沉淀，最后将沉淀进行冷冻干燥，即得γ-谷氨酰转肽酶酶粉。