[发明专利]半滑舌鳎遗传性别及WW超雌鱼鉴定方法

摘要

本发明提供了一种半滑舌鳎遗传性别及WW超雌鱼鉴定方法，可以解决半滑舌鳎性别控制和全雌育种研究中不能鉴定ZW雌鱼和WW超雌鱼的问题。所采用的技术方案是：一种半滑舌鳎遗传性别鉴定方法，包括如下步骤：1)半滑舌鳎血液样品的制备；2)半滑舌鳎细胞DNA含量的测定；3)半滑舌鳎遗传性别的鉴定。本发明建立了用流式细胞仪测定半滑舌鳎雌、雄鱼DNA含量，根据雌雄DNA含量差异鉴定半滑舌鳎ZZ雄鱼、ZW雌鱼以及WW超雌鱼的技术方法，为半滑舌鳎性别控制和全雌苗种的生产提供了可靠的技术手段。本方法可以在半滑舌鳎性别控制和全雌苗种生产中推广应用，也可以在其他鱼类性别控制中进行应用。

主权项

1、一种半滑舌鳎遗传性别鉴定方法，其特征在于包括如下步骤：1)半滑舌鳎血液样品的制备用肝素钠溶液润湿过的注射器抽取半滑舌鳎血液，取0.1-0.2ml血液，离心后取血细胞沉淀重悬于1ml 0.9％NaCl溶液中；取49-51μl重悬的血细胞置于含5ml 0.9％NaCl的50ml离心管中，逐滴加入15ml冰冷的95％乙醇，边加边摇以防血细胞聚集成团，从而对血细胞进行固定；随后用磷酸缓冲液PBS清洗固定的血细胞2遍，用血球计数板计数血细胞浓度，将血细胞浓度调至105-106个/ml；2)半滑舌鳎细胞DNA含量的测定取步骤1)中的调节好浓度的血样1ml，碘化丙啶PI染色液染色30min，用流式细胞仪对血样中的细胞DNA含量进行测定，用Cellquest软件分析，同时取鸡血作为对照，鸡血DNA含量为2.5pg/2c，测定结果以DNA含量直方图的形式显示；3)半滑舌鳎遗传性别的鉴定用计算机软件对雌、雄半滑舌鳎细胞核DNA含量直方图进行比对，结果显示雌、雄半滑舌鳎细胞DNA含量有明显差异，并以鸡血DNA含量为参照计算出雌雄半滑舌鳎的平均DNA含量，半滑舌鳎正常雄鱼即ZZ染色体类型鱼血细胞的DNA含量为1.672±0.026pg，DNA含量直方图主峰的横坐标在41.54-42.42之间；半滑舌鳎正常雌鱼即ZW染色体类型鱼血细胞的DNA含量为1.766±0.031pg，比雄鱼血细胞的DNA含量多5.62％，DNA含量直方图主峰的横坐标在45.31-47.53之间，因此，通过测定半滑舌鳎血细胞的DNA含量可鉴定半滑舌鳎遗传性别。