[发明专利]重组牛胰核糖核酸水解酶A的表达及纯化方法

摘要

一种重组牛胰核糖核酸水解酶A(RNaseA)的表达及纯化方法，利用现代生物学中的基因表达和蛋白纯化技术，对以往的重组RNaseA的制备方法进行改进，提供一种在生物医药可以广泛推广、安全、可行且大幅度降低了制造的成本的重组RNaseA的制备方法。

主权项

1.一种重组牛胰核糖核酸水解酶A的表达及纯化方法，其特征是流程为：(1)利用生物信息学找出保守序列，提取牛胰脏的基因组脱氧核糖核酸；(2)设计、合成引物，用PCR扩增目的基因，琼脂糖电泳验证；(3)用限制性内切酶NcoI及XhoI分别消化PCR产物和表达载体pET-20b；(4)回收酶切产物并酶连至表达载体pET-20b上，将酶连产物转化至感受态细胞DH5a，抽提质粒，酶切验证并测序；(5)将验证正确的包含牛胰核糖水解酶A基因的重组质粒转化至表达菌株BL21(DE3)pLysS中；(6)挑单菌落到含氨苄青霉素的LB培养基中培养，当OD600达到0.9-1.2时，加入异丙基-β-D-硫代半.乳糖苷诱导；(7)离心收菌，并加入细胞悬浮液悬浮细胞；(8)采用超声波细胞裂解法破碎细胞，使目的蛋白释放到缓冲液中；(9)验证蛋白表达及其溶解的情况，并筛选出表达量高的菌种；(10)用金属亲和柱纯化包含组氨酸标签的目的蛋白；(11)检测所纯化的蛋白的活性。