[发明专利]一种瑞士乳杆菌蛋白酶水解乳蛋白生产抗高血压活性肽的方法

摘要

本发明涉及一种瑞士乳杆菌蛋白酶水解乳蛋白生产抗高血压活性肽的方法。所说的方法是：先从瑞士乳杆菌ATCC15019中，经菌体破碎、离心、盐析、三步柱层析，分离得到瑞士乳杆菌ATCC15019蛋白酶Q；再用得到的蛋白酶Q水解乳蛋白；最后水解液经过超滤、冷冻干燥、Sephadex G－25离子交换层析、μBondasphere C₁₈、YMC－Pack ODS－AP－303、YSK－Octadecyl 4PW及YMC－PackODS－100S四步反相液相色谱分离等步骤，制得多肽IPP和VPP。该方法可以同时制得多肽IPP和VPP，而且比现有的发酵法产生抗高血压肽更容易控制，便于批量生产。

主权项

1、一种瑞士乳杆菌蛋白酶水解乳蛋白生产抗高血压活性肽的方法，包括以下步骤：(1)瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)ATCC15019蛋白酶Q的分离纯化：将培养的瑞士乳杆菌ATCC15019菌体破碎后离心，收集其上清液，上清液经硫酸氨盐析后离心，取沉淀物溶于蒸馏水，再通过Sephadex G-100、Sepharose CL-6B和DEAE Sephadex A-25层析柱分离，收集能水解乳蛋白产生抗ACE活性的洗脱峰，得到瑞士乳杆菌ATCC15019蛋白酶Q；(2)蛋白酶Q水解乳蛋白：用瑞士乳杆菌ATCC15019蛋白酶Q水解乳蛋白；(3)抗高血压肽的分离纯化：a、先用孔径为10nm的陶瓷膜对乳蛋白水解物进行超滤以除去大分子物质，收集超滤液，冷冻干燥；b、将上述冻干粉溶于蒸溜水，离心，收集上清液，经Sephadex G-25离子交换层析后，再经μBondasphere C18(3.9×150mm)、YMC-Pack ODS-AP-303(4.6×250mm)、YSK-Octadecyl 4PW(3.9×150mm)及YMC-Pack ODS-100S(3.9×150mm)四步反相液相色谱分离，收集能水解乳蛋白产生抗ACE活性的洗脱峰，制得多肽异亮氨酸-脯氨酸-脯氨酸和缬氨酸-脯氨酸-脯氨酸。