[发明专利]HPV基因酵母体外翻译系统的建立

摘要

本发明公开了一种HPV基因酵母体外翻译系统的建立方法，本发明方法建立的改良的酵母体外翻译系统特别适用于人乳头瘤病毒(HPV)衣壳蛋白的体外表达，为研究HPV衣壳蛋白表达机制提供了一种方便快捷的方法；该系统还可同时适用于其他真核蛋白的体外表达。同时本发明所述体外翻译系统的建立为研究HPV晚期蛋白表达后VLP形成和DNA的包装提供了有效工具，并有望为HPV预防和治疗性疫苗的研究提供帮助。利用本发明方法还可用来制备各种酵母突变株的裂解物，用于研究真核mRNA转录后影响蛋白翻译的各种因素及相关分子的相互作用机制。

主权项

1.一种HPV基因酵母体外翻译系统的建立方法，步骤为：酵母细胞的选择与培养；酵母细胞原生质体的制备；酵母细胞裂解物的制备；含有目的基因的载体的构建；体外转录mRNA；外源性mRNA在酵母体外翻译系统中的翻译；Western Blotting检测目的蛋白的体外翻译；其特征是：所述酵母细胞选择啤酒酵母细胞Y303，保藏号为：ATCC No.96659，或者啤酒酵母细胞YPH500，保藏号为：ATCC No.76626；所述酵母细胞裂解物的制备中，酵母原生质体细胞的光密度值为A660nm＝1.0，裂解缓冲液每毫升含成分为：100mMHepes-KOH，120mM醋酸钾，2.5mM醋酸镁，1mM二硫苏糖醇，2.5mM ATP，1mM GTP，100μM S-腺蛋氨酸，1mM亚精胺，20mM磷酸肌酸，100mM蔗糖，40U肌酸磷酸激酶；所述外源性mRNA在酵母体外翻译系统中的翻译中，反应温度和时间是：30℃反应1-3小时，反应前外源性氨基酸尤其是亮氨酸的加入剂量为100μM，外源性的tRNA的加入剂量为10-5mM。