[发明专利]一种苄嘧磺隆高效降解菌株的筛选及降解活性的鉴定方法

摘要

本发明涉及生物降解农药残留技术领域，具体地说是一种苄嘧磺隆高效降解菌株的筛选及其降解活性的鉴定方法。具体为：1)降解菌的富集驯化；2)分离筛选；3)复壮、纯化；4)验证降解菌；5)鉴定降解菌株的降解活性，通过玉米生测法初筛出高活性降解菌，再利用高效液相色谱法最终确定高效降解菌株的降解率。本发明提供的方法能够高效，廉价地筛选出以苄嘧磺隆为唯一碳源的高活性降解菌株，可以为降解菌剂的制备提供有效的菌种资源。

主权项

1.一种苄嘧磺隆高效降解菌株的筛选方法，其特征在于包括以下步骤：1)降解菌的富集驯化：取8～10g接种源置入三角瓶中，加入80～100ml苄嘧磺隆浓度为50～100mg/L的富集培养基和5～10g玻璃珠，于28～30℃，150～180r/min摇床培养条件下振荡培养5～7天，备用；将培养液按体积百分比5～10％的接种量接种于苄嘧磺隆浓度为100～150mg/L的新的富集培养基中，于28～30℃，150～180r/min条件下振荡培养5～7天，而后将富集培养基中的苄嘧磺隆以50mg/L的浓度梯度递增，按上述接种量和培养过程再转接3～4次，得到富集菌液，待用；2)分离筛选：在80～100ml苄嘧磺隆浓度为100～150mg/L的选择性无机盐培养基中，按体积百分比5～10％的接种量接种步骤1)中的富集菌液，于28～30℃，180～200r/min条件下振荡培养5～7天；而后将培养液按体积百分比5～10％的接种量接种于苄嘧磺隆浓度为100～150mg/L的新的选择性无机盐培养基中，按上述培养过程再转接3～4次，得到以苄嘧磺隆为唯一碳源的混合菌液，待用；3)复壮、纯化：将分离筛选所得的混合菌液，稀释106～108倍，涂布于牛肉膏蛋白胨固体平板上，28～30℃培养2～3天，挑选不同性状的单菌落在牛肉膏蛋白胨平板上划线纯化；4)验证降解菌：将步骤3)中纯化好的菌株在选择性无机盐培养基固体平板上划线，其中选择性培养基内添加苄嘧磺隆至终浓度为100～150mg/L，28～30℃培养3～4天，能够生长的菌株即为能够以苄嘧磺隆为唯一碳源的降解菌株；5)鉴定降解菌株的降解活性：利用玉米生测法初筛出高活性的降解菌株，再利用高效液相色谱法确定高效菌株的降解率。