[发明专利]同时对乙肝病毒基因型定型和定量的方法

摘要

一种可同时对乙肝病毒进行基因型定型和定量的方法。还公开了(1)一对引物，其分别包含SEQ ID NO：13和14、SEQ ID NO：17和14、或SEQ ID NO：20和6的序列，每一引物的长度为8到50个碱基；(2)一对探针，其分别包含SEQ ID NO：18和19、SEQ ID NO：15和16、或SEQ ID NO：21和22的序列，每一探针长度为9到50个碱基；(3)一以乙肝病毒基因为模版扩增而得的核酸，其含有选自SEQ ID NO：15、19、22或其互补序列的序列，其序列长度为100到1000个碱基。

主权项

1.一种可同时鉴定乙肝病毒目标核酸的单核苷酸多态性和定量该目标核酸的方法，其包括：提供第一探针和第二探针，其中该第一探针与该目标核酸的第一序列相同或互补，所述第一序列包含与单核苷酸多态性相对应的碱基，所述第一探针的基因序列与SEQ ID NO：11的序列具有至少90％的相似度；其中该第二探针与该目标核酸的第二序列相同或互补，所述第二序列不包含与单核苷酸多态性相对应的碱基，所述第二探针的基因序列与SEQ ID NO：12的序列具有至少90％的相似度；通过聚合酶链式反应以一对引物来扩增该目标核酸，以形成一包含该第一序列和该第二序列的双链核酸产物，所述的一对引物之一的基因序列与SEQ ID NO：9的序列具有至少90％的相似度，以及所述一对引物的另一引物的基因序列与SEQID NO：10的序列具有至少90％的相似度；在反应液中将所述核酸产物分别与该第一探针和第二探针杂交，以分别形成第一双链和第二双链，其中该第一探针与第一荧光团共价结合，该第二探针与第二荧光团共价结合，其中该第一荧光团和该第二荧光团之一为荧光团供体，另一为荧光团受体，使得当该第一探针和第二探针与该目标核酸产物杂交时，该荧光团供体与该荧光团受体处于邻近位置，且其两者之间能够进行荧光共振能量转移(FRET)；加热该反应液，使得其温度高于该第一探针和其互补序列所形成的双链的解链温度；鉴定该单核苷酸多态性，通过用激发光照射该荧光团供体，并监测该第一探针的荧光团受体发出的荧光量的变化，该荧光量变化是升高的温度值的函数；和通过监测该荧光团受体所发出的荧光来定量该目标核酸。