[发明专利]一种提高大豆球蛋白与伴大豆球蛋白比值的转基因方法

摘要

本发明为一种提高大豆球蛋白与伴大豆球蛋白比值(11S/7S比值)的转基因方法，属于大豆转基因育种方法，是将非洲菊花器官发育调节基因gagal利用花粉管通道法转入大豆，对转基因植株苗期进行卡那霉素鉴定，筛选出抗卡那植株，进一步进行PCR鉴定，并结合大豆种子贮藏蛋白十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺(SDS－PAGE)鉴定、11S/7S测定，选育出高11S/7S比值的转基因大豆材料，其11S/7S含量高达3.6，是未转化对照(1.7)的2倍多。

主权项

1、一种提高大豆球蛋白与伴大豆球蛋白比值的转基因方法，包括：1)应用包含有非洲菊花器官发育调节基因gagal的农杆菌TAT613，利用花粉管通道法转化大豆N2899；2)从T1代开始，对转基因植株苗期进行卡那霉素抗性鉴定，将抗性植株进一步做PCR鉴定，PCR扩增体系含0.25mM dNTP，MgCl2，1U Taq酶，0.5μM Primer，100-200ng DNA，总体积25μl，PCR扩增反应条件：预变性95℃ 5min，后经95℃ 15s，52℃ 59s，72℃ 2min，30个循环，72℃延伸10min，选择PCR鉴定结果为阳性的材料；3)从T3代开始对转基因后代种子贮藏蛋白进行十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，结果与未转化对照相比较，其中有7S组分中α和α’亚基含量减少甚至缺失的转基因后代，即为转基因方法获得的提高大豆球蛋白与伴大豆球蛋白比值的材料。