[发明专利]一种从珍珠质中提取可溶性基质蛋白的方法

摘要

一种从珍珠质中提取可溶性基质蛋白的方法，属医学组织工程领域。本发明方法包括下述步骤：1)将珍珠层粉中加入磷酸氢二钠－磷酸二氢钾缓冲液中，于4℃搅拌72小时，离心，收集上清；2)上清液经超滤、透析除盐浓缩后，干燥得珍珠质可溶性基质；3)将可溶性基质进行柱层析，收集280nm下有吸收峰的小分子组分；4)将以上组分进行高效液相色谱分离，收集280nm下有吸收峰的蛋白组分，干燥得成品。本发明分离纯化的珍珠质可溶性基质蛋白，可以广泛应用于制备预防和治疗骨质疏松药物、制备医用生物新材料、珍珠或类珍珠材料的体外培养及提高珍珠产量与质量等领域。

主权项

1.一种从珍珠质中提取可溶性基质蛋白的方法，其特征是由下列步骤组成：1)将粉碎后的珍珠质中加入磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液中，于4℃搅拌72小时，离心，收集上清；2)上清液经超滤、透析除盐浓缩后，干燥得珍珠质可溶性基质；3)将可溶性基质进行柱层析，收集280nm下有吸收峰的小分子组分；4)将以上组分进行高效液相色谱分离，收集280nm下有吸收峰的蛋白组分，干燥得成品；在上述过程中，所述将珍珠层粉在4℃条件下搅拌时所用的是珍珠层粉质量2～5倍，pH为7.0，浓度1～2mM的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液；所述采用超滤、透析等方式除盐时，超率拄和透析袋的截留分子量小于3KD；干燥采用冷冻干燥的方式； 所述柱层析中的填料为Sephadex G-75葡聚糖凝胶，流动相为pH为7.0，浓度1～2mM的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液，收集的为280nm下有吸收的分子量较小的，相对较晚洗脱下来的组分；所述高效液相色谱中的填料为C18颗粒，流动相为浓度在0-100％之间梯度递增的乙腈水溶液，收集的为280nm下有吸收的三个主要蛋白峰中的第三个峰所对应时间洗脱下来的蛋白组分。